· polyacrylamideជែលត្រូវតែដោយ acrylamide monomer វត្ថុធាតុចាប់ផ្តើមវត្ថុធាតុ polymerization កាតាលីករ និងសិទ្ធិនៃល្បាយអំបិល និងសតិបណ្ដោះអាសន្នរួមគ្នា។
· អាគ្រីឡាមីតនិង BIS (N, N '- methylene double acrylamide) គឺជាទម្រង់ម៉ូណូមឺរ ជែលម៉ាទ្រីស។
· ammonium persulfate ចាប់ផ្តើមដំណើរការ polymerization adhesive ។ការបង្កើតកាវបិទត្រូវការដំណោះស្រាយអាម៉ូញ៉ូមស៊ុលហ្វាត 10% ដែលរៀបចំក្នុងទឹក។ព័ត៌មានភាគច្រើនបង្ហាញពីតម្រូវការសម្រាប់ការប្រើប្រាស់សកម្ម។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ ដំណោះស្រាយ 10% អាចដាក់នៅសីតុណ្ហភាព 4 ℃ រយៈពេលជាច្រើនសប្តាហ៍ដោយមិនបាត់បង់សកម្មភាពសំខាន់ៗ។បង្កើតរហូតដល់ 10 មីលីលីត្រហើយបោះចោលនៅពេលដែលកាវមិនអាចប្រមូលផ្តុំបាន។
គន្លឹះ៖ ភាគរយនៃអាគ្រីឡាមីតក្នុងការភ្ជាប់កាវ និងកាវប្រូតេអ៊ីនគឺមិនដូចគ្នាទេ។ប្រសិនបើប្រើ acrylamide ដែលផលិតជាមុន៖ ដំណោះស្រាយ BIS ត្រូវប្រាកដថាទទួលបានដបត្រឹមត្រូវ។
· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) គឺជាកាតាលីករ នៅក្នុងដបពណ៌ត្នោត ដាក់ក្នុងទូទឹកកក។បន្ថែមមុននឹងចាក់កាវ។
· polyacrylamide electrophoresis កញ្ចក់ដែលប្រើក្នុង electrophoresis គួរតែត្រូវបានលាងសម្អាតមុន និងក្រោយរាល់ពេល។បន្ទាប់ពី electrophoresis លាងសម្អាតដោយប្រើជក់ទន់ និងក្រណាត់ក្នុងទឹកសាប៊ូក្តៅ លាងជមែះជាមួយទឹកចម្រោះ រួចឈរឱ្យស្ងួត។
· សំណើម និងធូលីអាចបណ្តាលឱ្យមានវត្ថុធាតុ polymer ប្រហោង។មុនពេល electrophoresis សម្អាតចានកញ្ចក់ដោយប្រើឧបករណ៍សម្អាតកញ្ចក់ហើយជូតវាដោយប្រើជក់ទន់។លាងសម្អាតដោយទឹកចម្រោះ ហើយស្ងួតដោយក្រដាសជូតមាត់។ការលាងសម្អាតជាមួយនឹងអេតាណុល 70% មុនពេលជូតជាមួយក្រដាស អាចជួយសម្អាត និងពន្លឿនការស្ងួត។បន្ថែមសំណាកអាគ្រីឡាមីតជាបន្តបន្ទាប់៖ BIS, ទឹក, ដំណោះស្រាយសតិបណ្ដោះអាសន្ន, អាម៉ូញ៉ូមស៊ុលហ្វាត, TEMED ។អ្រងួនឱ្យបានល្អហើយចាក់ភ្លាមៗ។
វាមិនចាំបាច់ក្នុងការ degass polyacrylamide មុនពេល polymerization ។(Acrylamide ធ្លាប់ត្រូវដាក់ក្នុងកន្លែងខ្វះចន្លោះដើម្បីយកពពុះចេញព្រោះអុកស៊ីហ្សែនរារាំងការធ្វើវត្ថុធាតុ polymerization ។ )
គន្លឹះគំរូចំណុចកាវផ្តេក។
· ដាក់ក្រដាសខ្មៅមួយសន្លឹកក្នុងប្រអប់ខាងក្រោម ផ្ទៃខាងក្រោយខ្មៅ ដើម្បីធ្វើរន្ធគំរូខ្លះ ដើម្បីឲ្យមើលឃើញកាន់តែច្បាស់។
· ធុងកាវបានបំពេញសតិបណ្ដោះអាសន្ន ពីលើកូឡាជែន។
· ប្រសិនបើគែមមានពន្លឺ សូមបើកភ្លើង ទុកឱ្យពន្លឺចាំងពណ៌កូឡាជែន។គូរគំរូចូលទៅក្នុងបំពង់។
·ដោយប្រើឧបករណ៍បំពង់បង្ហូរដោយស្វ័យប្រវត្តិ។
· ក្នុង 10-200 mu 1 ចំណុចផ្លាស់ទីរាវអាចត្រូវបានប្រើនៅក្នុងភាគច្រើននៃចំណុចនៅលើគំរូ។សម្រាប់រន្ធគំរូតូចបំផុត (តិចជាង 10μ1) ក្បាលបំពង់វែងដែលប្រើសម្រាប់ភ្ជាប់កាវគឺងាយស្រួលជាង។
· បំពង់គ្រាន់តែដាក់ក្នុងសំណាកដោយស្រូបយកសារធាតុរាវដែលផ្លាស់ទីយឺតៗ។គំរូអាចមើលទៅស្អិតជាមួយគ្លីសេរីន ហើយការបូមលឿនអាចទាញពពុះខ្យល់ចូលទៅក្នុងក្បាលបំពង់។
· សំណាកបន្ទាប់ពីស្រូបក្បាលបំពង់ វានឹងផ្លាស់ទីក្បាលរាវដោយថ្នមៗនៅលើគែមបំពង់ ឬក្រដាសជូតមាត់ដែលជញ្ជក់ក្បាលរាវនៅខាងក្រៅដំណក់ទឹក។ប្រយ័ត្នកុំបូមយកគំរូ។
ដាក់គំរូទៅក្នុងរន្ធគំរូ
· ឧបករណ៍បំពង់ដើម្បីរក្សាសម្ពាធតិចតួច ធ្វើឱ្យគំរូផ្លាស់ទីបន្តិច ក្បាលរាវដែលហៀរចេញ។
· ក្បាលបំពង់បញ្ចូលទៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្ន ខ្ពស់ជាងរន្ធកន្លែងបន្តិច រក្សាសម្ពាធវិជ្ជមាន។ចុងបំពង់អាចត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងរន្ធតូចមួយ។
· យឺតៗ និងស្ថិរភាព គំរូចេញ។ចុងបំពង់ត្រូវបានដាក់នៅពីលើរន្ធគំរូចំនុច ហើយសំណាកនឹងលិចចូលទៅក្នុងរន្ធ។ទុកឱ្យគំរូលិចដើម្បីបំពេញរន្ធគំរូជំនួសឱ្យការរុញចូល។
· នៅពេលដែលដំណក់ចុងក្រោយនៃគំរូជាមួយនឹងក្បាលរាវ អង្គធាតុរាវនឹងផ្លាស់ទីទៅជើងទីពីរ បង្កើនចលនារាវយឺតៗ ផ្លាស់ទីចេញពីសតិបណ្ដោះអាសន្ន។
តើធ្វើដូចម្តេចដើម្បីធ្វើគំរូកាវបិទបញ្ឈរ?
· រន្ធគំរូចំណុចកាវបញ្ឈរដែលបង្កើតឡើងរវាងកញ្ចក់ពីរ។នៅក្នុងកាវស្តើងពេក ក្បាលបំពង់មិនអាចដាក់បញ្ចូលរវាងចានកែវពីរបានទេ។មើលគ្លីសេរីន!ដាក់ក្បាល pipette ពីលើរន្ធគំរូ ហើយសំណាកនឹងលិចចូលទៅក្នុងរន្ធ។
· ចំណុចគំរូមុន ត្រូវប្រាកដថាដាក់ចំណុចបញ្ឈរនៃរន្ធគំរូ polypropylene acyl gel ត្រូវលាងសម្អាតឱ្យស្អាត។លាងជម្រះអាគ្រីឡាមីតដែលមិនមានសារធាតុប៉ូលីម៊ែរ និងទឹកដែលអាចលេចឡើងនៅបាតរន្ធគំរូ។ទឹកអាចធ្វើឱ្យរន្ធគំរូតូចជាងយ៉ាងខ្លាំង។ប្រើសឺរាុំង 25ml ឬ 50ml និងម្ជុល 18 រង្វាស់។ចាក់ចូលទៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្ន electrophoresis និងដោយប្រុងប្រយ័ត្នបង្ហូររន្ធគំរូ។
· វាអាចពិបាកក្នុងការមើលរន្ធគំរូ ប៉ុន្តែនៅដដែល នៅសល់គឺងាយស្រួល។ប្រសិនបើមានរន្ធលើស សតិបណ្ដោះអាសន្នគំរូអាចត្រូវបានសាកល្បងជាមួយនឹងសារធាតុ bromophenol ពណ៌ខៀវ។
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី៣១ ខែមីនា ឆ្នាំ២០២៣